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產品品牌
: REAGEN -
產品貨號
: RNS92049 -
產品規格
: 20T -
產品適用
: 流感病毒H5N1的檢測和判定 -
產地來源
: 深圳
【產品名稱】
通用名稱:流感病毒H5N1亞型核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
【包裝規格】
50人份/盒
【預期用途】
對樣本中流感病毒H5N1亞型RNA進行檢測,適用于流感病毒H5N1型感染的輔助診斷及流行病學調查。
【檢驗原理】
本試劑盒采用聚合酶鏈式反應(PCR)結合Taqman技術,對禽流感病毒H5N1亞型的特異性核酸片段進行熒光PCR檢測。
【主要成分】
組分成分 | 50人份/盒 | 主要成分 | |
規格 | 數量 | ||
PCR反應液 |
884μL /管 |
1管 | 引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、緩沖體系 |
酶混合液 | 156μL /管 | 1管 | Taq酶、MMLV酶 |
陽性對照 | 200μL /管 | 1管 | 含目的片段的質粒 |
陰性對照 | 500μL /管 | 1管 | 無核酸酶水 |
【儲存條件及有效期】
試劑置于-30~-15℃避光保存,有效期為12個月。本產品反復凍融應不超過5次。
【適用儀器】
熒光定量PCR儀:ABI 7500熒光PCR儀.;ABI Quantstudio5 ;Gentier 96R;SLAN-96P全自動醫用PCR分析系統。
【樣本要求】
1. 適用樣本
咽拭子:應使用專用采樣拭子,適度拭抹咽后壁和兩側扁桃體部位;迅速將拭子放入標本采集管中,旋緊管蓋并密封,以防干燥。
全血:疑似感染動物的靜脈血2mL至EDTA-2Na抗凝管,8000rpm離心2min,取適量上清液于1.5mL滅菌離心管中。
2. 樣本運輸和保存
上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過6個月,標本運送應采用2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。
【檢驗方法】
1. 樣本處理
取待測樣本200ul,按照核酸提取試劑盒說明書進行核酸提取。
2. 試劑配置(在準備區進行,與擴增區分開,冰上操作)
注:試劑使用前要完全解凍,使用前渦旋混勻,10000 rpm離心5 s,確保試劑完全離心至管底,否則會出現裝量差異的現象。
若有N個待檢測樣本,則需配置N+2擴增反應(待檢樣本數N+1個陽性質控品+1個陰性質控品),按下表要求進行擴增反應液的配制,配制完成后充分震蕩混勻,10000 rpm離心5 s。按每管20μL分裝至0.2 ml PCR管中,并做好標記,擴增反應液需現配現用。
N人份(μL) | |
PCR反應液 | (N+2)×17 |
酶混合液 | (N+2)×3 |
總量 | (N+2)×20 |
3. 加樣(在樣品處理區進行,冰上操作)
按陰性質控品、待測樣品、陽性質控品的加樣順序,分別取5μL,加入至已分裝擴增反應液的八聯管中,反應總體系為25μL。蓋緊管蓋,短暫離心后置于熒光定量PCR儀中,并記錄樣本擺放順序。
4. 擴增反應(在擴增區進行)
選擇FAM通道檢測H5亞型,選擇HEX通道檢測N1亞型。按以下擴增程序表設置PCR擴增參數。
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 | |
1 | 逆轉錄 | 50℃ | 10min | 1 |
2 | 預變性 | 95℃ | 3min | 1 |
3 | 變性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
4 | 退火延伸及熒光檢測 | 55℃ | 30 sec | |
報告熒光:FAM、HEX;淬滅熒光:NONE。 |