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產品品牌
: REAGEN -
產品貨號
: RPD990203 -
產品規格
: 50/100T -
產品適用
: 對貓眼鼻分泌物中貓杯狀病毒RNA進行檢測。 -
產地來源
: 深圳
【產品名稱】
通用名稱:貓杯狀病毒核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
【包裝規格】
50人份/盒
【預期用途】
對貓眼鼻分泌物中貓杯狀病毒RNA進行檢測。
【檢驗原理】
本試劑盒采用聚合酶鏈式反應(PCR)結合Taqman技術,對貓杯狀病毒的特異性RNA核酸片段進行熒光PCR檢測。
【主要成分】
組分成分 | 50人份/盒 | 主要成分 | |
規格 | 數量 | ||
PCR反應液 |
884μL /管 |
1管 | 引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、緩沖體系 |
酶混合液 | 156μL /管 | 1管 | Taq酶、MMLV酶 |
陽性對照 | 200μL /管 | 1管 | 含目的片段的質粒 |
陰性對照 | 500μL /管 | 1管 | 生理鹽水 |
【儲存條件及有效期】
試劑置于-30~-15℃避光保存,有效期為12個月。本產品反復凍融應不超過5次。
【適用儀器】
熒光定量PCR儀:ABI 7500熒光PCR儀.;ABI Quantstudio5 ;Gentier 96R;SLAN-96P全自動醫用PCR分析系統。
【樣本要求】
眼鼻分泌物
【檢驗方法】
1. 樣本處理
請根據具體樣本類型選用適當的核酸提取試劑(自備) 并按照該試劑的說明書提取 DNA。提純后的核酸應盡快用于檢測,或于-20℃保存。
2. 試劑配置(在準備區進行,與擴增區分開,冰上操作)
注:試劑使用前要完全解凍,使用前渦旋混勻,10000 rpm離心5 s,確保試劑完全離心至管底,否則會
出現裝量差異的現象。
若有N個待檢測樣本,則需配置N+2擴增反應(待檢樣本數N+1個陽性質控品+1個陰性質控品),按下
表要求進行擴增反應液的配制,配制完成后充分震蕩混勻,10000 rpm離心5 s。按每管20μL分裝至0.2 ml PCR
管中,并做好標記,擴增反應液需現配現用。
N人份(μL) | |
PCR反應液 | (N+2)×17 |
酶混合液 | (N+2)×3 |
總量 | (N+2)×20 |
3. 加樣(在樣品處理區進行,冰上操作)
按陰性質控品、待測樣品、陽性質控品的加樣順序,分別取5μL,加入至已分裝擴增反應液的PCR管中,反應總體系為25μL。蓋緊管蓋,短暫離心后置于熒光定量PCR儀中,并記錄樣本擺放順序。
4. 擴增反應(在擴增區進行)
選擇FAM通道檢測貓杯狀病毒核酸。按以下擴增程序表設置PCR擴增參數。
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 | |
1 | 逆轉錄 | 50℃ | 10min | 1 |
2 | 預變性 | 95℃ | 3min | 1 |
3 | 變性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
4 | 退火延伸及熒光檢測 | 60℃ | 30 sec | |
報告熒光:FAM;淬滅熒光:NONE。 |
5. 質量控制
FAM通道Ct值 | |
陰性對照 | UNDET |
陽性對照 | ≤35 |
以上要求需在同一次實驗中同時滿足,否則,本次實驗無效,需重新進行。
6.結果判讀
反應結束自動保存結果,根據分析后圖像調節Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值(可以根據實際情況自行調整,Start 值可以在3~15、End 值可設在5~20,調整陰性對照的擴增曲線平直或低于閾值線),點擊Analysis 自動獲得分析結果,在Report 界面觀看結果。
試驗結果判斷:
通道 | 陽性判斷條件 | |
1 | FAM | Ct值≤40,且擴增曲線呈典型S型,報告陽性 |
2 | FAM | Ct值>40,報告為陰性。 |
【檢驗結果的解釋】
1. 實驗室環境污染,試劑污染,樣品交叉污染會出現假陽性結果,如陰性對照檢測為陽性,則需做進
一步實驗來確認是哪類污染。如為試劑污染,需開封新的試劑盒再次進行實驗;如為樣品交叉污染,應重復實驗;如為實驗室環境污染,需對實驗室進行徹底清潔或更換實驗室再進行實驗。
2. 試劑運輸、保存或配制不當會引起試劑檢測性能下降,出現假陰性結果。如陽性對照檢測為陰性,
應開封新的試劑盒再進行實驗。
【檢測方法的局限性】
1. 該試劑盒僅為定性產品,不做定量測定。
2. 當樣本的病毒含量低于最低檢出限時,可能會出現假陰性。陰性結果僅說明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測極限,但不能完全排除病毒感染的可能。
【產品性能指標】
1.準確性:企業陽性參考品檢測結果全部為陽性,陽性率為15/15。
2.最低檢測限:該試劑盒最低檢測限為500copies/mL。
【注意事項】
1.請嚴格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰上操作。
2.試劑配制建議在試劑配制區進行,樣品處理要求在生物安全柜內操作。臨床實驗室應嚴格按照《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》等有關分子生物學實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規范執行。
3.反應液中的成分對光敏感,應避光保存。反復凍融可能降低試劑盒靈敏度,請按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。
4.反應結束后,擴增管請置于密封袋內丟棄,當日清理,切忌開蓋。
5.不同批號試劑請勿混合使用,請在有效期內使用試劑盒。
6. 本品僅用于體外診斷。